均匀实验设计法 均匀设计法优化阿司匹林合成工艺研究

昭棠笔记 2023-01-25

曲终人散谁无过错-汪峰好听的歌

2022年5月1日发

(作者:清风dj嗨嗨网)

福建农林大学学报(自然科学版) 

Journal of Fujian Agriculture and Forestry University(Natural Science Edition) 

第4JD卷第6期 

2011年l1月 

均匀设计法优化提取银杏营养贮藏 

蛋白质及其电泳分析 

徐文斌搜索排名,吴彩娥,李婷婷,范龚健郴州网站建设,贾韶千,彭方仁 

(南京林业大学森林资源与环境学院合肥关键词排名,江苏南京210037) 

摘要:以蛋白质提取率为考察指标如何网站制作,选取不同溶液提取银杏营养贮藏蛋白质;运用均匀设计法考察提取时间网络营销模式,提取液pH 

值、浓度和液料比等对银杏营养贮藏蛋白质提取率的影响,得到了蛋白质提取率的回归模型.经优化筛选后得到如下工艺 

参数:提取时间为10 h医院营销策划方案,提取pH为9.0,提取液Tfis-HC1浓度为0.25 tool・L~,提取液液料比为10:1.在此条件下蛋白质提 

取率为70.22%.SDS—PAGE电泳分析结果表明,该蛋白质提取液主要含有15、18、23、32、36和44 ku 6种蛋白质. 

关键词:均匀设计;银杏营养贮藏蛋白;Tris-HC1 

中图分类号:Q946-33 文献标识码:A 文章编号:1671-5470(2011)06-0648-05 

Extraction of ginkgo vegetative storage proteins 

by uniform design and its electrophoresis 

xu Wen-bin中山百度,WU Cai-e,LI Ting—ring,FAN Gong-jian上海百度代理,JIA Shao—qian论坛营销案例,PENG Fang—ren 

(College of Forest Resources and Environment,Nanjing Forestry University徐汇网站建设,Nanjing长尾词库,Jiangsu 210037seo网络培训,China) 

Abstract:Ginkgo vegetative storage protein waft extracted with diferent solutions using the extraction rate of protein as index.The 

effects of extraction time,pH广州排名seo公司,solvent concentration and the ratio of liquid to solid were investigated using he metthod of uniform de— 

sign.After statistical analysis,the mathematics model of extraction rate of protein Was established.The results showed that the opti- 

munl extraction condition Was as fonows:extraction time Was 10 h,pH value of solvent Was 9.0 solvent concentration Was o.25 tool 

・L~and the ratio ofliquid to solid wa8 10:1.Underthese conditions.the extraction rate ofprotein reached70.22%.SDS-PAGE 

analysis result suggested hatt six kinds ofproteins were extrctead,and their molecular mass were 15,18排名技术,23百度的电话,32,36 and 44 ku,re’ 

spectively. 

Key words:uniform desin;ginkgo vegetgative storage protein;Tris・HC1 

银杏(Ginkgo biloba L.),俗称白果树,古称公孙树、鸭脚树,属于银杏科(Ginkgoaceae)银杏属( 一 

g0)外贸seo,为我国特有的多年生落叶乔木,是新生代第四纪冰川之后地球上幸存下来的孑遗植物,素有“活化 

石”、“植物界熊猫”之称….营养贮藏蛋白质(vegetative storage proteins重庆产品推广,VSP)是许多落叶树木越冬期间贮 

藏氮素的主要形式.树木中氮素的季节性循环与树木在秋季和春季的休眠密切相关国外推广,VSP的积累主要受光 

周期、寒冷或季节变换影响[2.3].银杏营养贮藏蛋白质主要存在于枝条的皮层和木质部的韧皮薄壁细胞、 

韧皮射线细胞、木射线、次生韧皮部与初生木质部之间的细胞中H】.已有学者对银杏营养贮藏蛋白质进行 

细胞学观察和一些生化性质的测定黑链出售,并对银杏营养贮藏蛋白质进行了准确定位,确定银杏营养贮藏蛋白质 

的分子质量主要为32和36 ku[4.5].但目前对于银杏营养贮藏蛋白质的提取及分离纯化鲜有报道.均匀设 

计是一种试用于多因素多水平试验的设计方法 ],与正交试验相比百度客服,它只考虑试验点的“均匀分散性”,而 

不考虑“整齐可比性”,具有试验次数少、信息量大的优点[7],试验次数大为减少l8].本文以银杏枝条为原 

料提取银杏营养贮藏粗蛋白质,以蛋白质提取率为评价指标,选取更佳提取溶液;采用均匀设计进行试验, 

以二次多项式逐步回归方法建立数学模型方程网上商城怎样推广,考察提取时间、提取液浓度、提取液pH以及液料比对提取 

效果的影响七台河市贴吧,确定更佳提取工艺条件登陆百度,以期为后续银杏营养贮藏蛋白质的分离纯化及结构鉴定提供依据. 

收稿日期:2011—02—21 修回日期:2011—10—12 

基金项目:自然科学基金资助项目(30872055);教育部博士点基金资助项目(200802980004、20070298008);江苏高校优势学科建设工 

程资助项目(PAPD). 

作者简介:徐文斌(1986一),男,硕士研究生.研究方向:经济植物资源的加工利用.Email:xwb860517@yahoo.cn.通讯作者吴彩娥(1963一), 

女网站自然优化,教授,博士生导师.研究方向:食品活性物质分离纯化与经济植物资源加工利用. 

第6期 徐文斌等:均匀设计法优化提取银杏营养贮藏蛋白质及其电泳分析 ・649・ 

l材料与方法 

1.1材料 

银杏枝条为2009年12月采自南京林业大学校园内的成龄银杏1—2年生健壮枝条.采用单面刀片取 

其枝条皮层,50℃下烘至恒重. 

1.2试验试剂 

石油醚、无水乙醇、硫酸铵、氢氧化钠、冰醋酸、甘氨酸、丙三醇、过硫酸铵(AP)、四甲基乙二胺 

(TEMED)、丙烯酰胺和甲叉双丙烯酰胺由南京化学试剂有限公司提供;考马斯亮兰G-250和盐酸由国药 

集团化学试剂有限公司提供;8一巯基乙醇由南京赛吉科技有限公司提供;三羟甲基氨基甲烷(Tris)由成都 

科龙化学试剂厂提供.以上试剂均为分析纯. 

1.3仪器与设备 

TU一1800PC紫外分光光度计由北京普析通用容器有限责任公司提供;Mini Protean 3伯乐电泳仪由美 

国BIO-RAD生化科技有限公司提供;TS2000A往复摇床由海门市麒麟贝尔仪器制造有限公司提供; 

BS210S电子天平由北京赛多科斯天平有限公司提供;2—16K冷冻离心机由德国Sigma实验室离心机公司 

提供;KDN-04B定氮仪由上海新嘉电子有限公司提供. 

1.4试验方法 

1长沙网络营销培训。4.1 原料的预处理取银杏枝条皮层刷百度排名,经液氮研磨成粉末奏鸣工具,每克银杏枝条粉中加入10 mL石油醚,磁力 

搅拌2 h百度网盟开户,抽滤;滤上物再次加入石油醚,重复上述操作网店推广技巧,直至颜消失.脱脂后将银杏枝粉在通风环境下挥 

发48 h查网站关键词排名,以除去石油醚.脱脂后的银杏枝粉放置于防潮的塑料袋中密闭保存、备用. 

1.4.2提取溶液的选择分别将pH为8.5的0.1 tool・L~Tds—HC1缓冲液、蒸馏水、0.1 tool・L NaC1 

溶液(10 mL)与脱脂银杏枝条粉(1 g)混合百度 竞价排名,在调速振荡器上振荡提取一定时间后郑州网站优化,滤去沉淀爱站工具,保留银杏贮 

藏蛋白质上清液. 

1.4.3 指标的测定 以蛋白质提取率作为测定指标a5seo,根据下式计算提取率: 

蛋白质提取率=亘鋈釜蔷喜耋量×10o% 

其中,可溶性蛋白含量采用考马斯亮蓝法[9】测定;总蛋白含量采用凯氏定氮法测定. 

1.4.4均匀试验的设计采用混合水平均匀设计方案 ],考察提取时间,提取液pH、浓度,液料比对蛋白 

质提取率的影响,试验因素水平设置见表1. . 

表1 Tris-HCI提取银杏营养贮藏聋白质的因素与水平 

Table1 Levels andfactors of extracting vegetative stroage proteins by Tris.HC1 

水平 液料比 水平 比 

1 1 7.0 0.05 10:1 7 7 

2 2 7.4 O.1O 15:1 8 8 

3 3 7.8 0.15 20:1 9 9 

4 4 8.2 .0.20 25:1 1O 1O 

5 5 8.6 0.25 30:1 11 1l 

6 6 9.0 0.3O 35:1 12 12 

1.4.5更优提取工艺参数的确定及验证对试验数据进行逐步回归分析,建立回归方程,通过方程推导 

出更优理论组合及银杏贮藏蛋白质提取率,并依据原操作步骤对更优理论组合进行验证. 

1.4.6 电泳分析对照硫酸铵饱和度表,计算达到80%饱和度时的硫酸铵加人量.在磁力搅拌器的搅拌 

下泛站,缓缓加入称量好并已经研磨粉碎的硫酸铵;待硫酸铵全部加入后又名苏州站长网,将提取液静置4 h石家庄网站制作公司,5000 r・min 离 

心20 min网络营销导航,弃上清液,收集沉淀.将离心得到的沉淀用少量0.01 tool・L s—HC1(pH值为8.5)溶解,使 

用蒸馏水进行透析seo优化方案,直至BaC1:溶液中无白沉淀生成谷歌推广,收集蛋白质溶液,浓缩.参考郭红彦 的方法百度竞价学习, 

SDS—PAGE采用15%分离胶和4.4%浓缩胶百度快照是什么,上样量2O 网站历史查询,以低分子质量标准蛋白质为Marker网站建设策划,浓缩胶内 

稳定电压60 V,分离胶中稳定电压120 V.考马斯亮蓝染法采用考马斯亮蓝R 长沙网络营销培训。一甲醇一冰乙酸染过 

・650・ 福建农林大学学报(自然科学版) 第40卷 

夜河南建设网站,甲醇一冰乙酸脱3 h,蛋白质呈蓝. 

1.5数据统计 

所有试验设3次重复额尔古纳市贴吧,应用DPS软件对试验数据进行方差分析镇江网站制作,设置显著水平P<O.05及P<0.01. 

2结果与讨论 

2.1提取溶液的选择 

采用凯氏定氮法测定的银杏枝条粉中总蛋白含量为5.76%.按照1.2.2所述的试验条件对银杏营养 

贮藏蛋白质提取液进行选择深圳seo教程,考察不同提取液对蛋白质提取率的影响.由图1可知,不同时间下采用Tris— 

HC1提取法的蛋白质提取率均为更高快照软件,蒸馏水次之什么叫权重,NaCI溶液更低.随着时间的延长,采用蒸馏水和NaC1 

溶液提取的蛋白质提取率变化不大,而采用Tris-HC1提取的蛋白质提取率不断提高.这是由于蛋白质的等 

电点大多在酸性范围内[1 采集站,在碱性条件下缓冲能力良好外链出售,而Tris-HC1缓冲液在弱碱性环境下缓冲能力良 

好.陈振家等 ¨ 和陈建南等 均以Tris.HC1缓冲液提取了大豆贮藏蛋白质,而张俊环等 庆阳网站建设。 在对杏树皮总 

蛋白质进行提取时也采用了Tris—HC1提取法.本试验结果表明网站恢复,提取银杏营养贮藏蛋白质时,Tris-HC1缓 

冲液的提取效果优于蒸馏水和NaC1溶液麻城seo,因而选择Tris—HC1作为提取溶液. 

5O 

40 

30 

哥 墓20 

嚣10 

O 

O.5 2 

4 

提取时间/h 

图1不同提取液对蛋白质提取率的影响 

Fig.1 Effect ofdiferont extracting solution onthe extraction rate of proteins 

2.2均匀设计结果 

选择U :(12×6。)表安排试验网络推广玄家配资网,结果见表2白帽技术,其中 为提取时间(h),x2为提取液pH,X3为提取液浓 

度(tool・L )危机公关的,五为料液比. 

表2均匀设计方案和试验结果(D=O.2618) 

Table 2 Uniform design and its rosu]ts 

试验号 

1 

2 

3 

4 

5 

1 

1 

2 

3 

4 

5 

提取率/% 试验号 

7.4 

7.8 

8.6 

9.0 

7.O 

l 

7 

8 

9 

1O 

11 

提取率/% 

8.2 

9.0 

7.0 

7.4 

8.2 

0.1 

0.2 

0.3 

0.1 

O.2 

35:1 

30:1 

25:1 

20:1 

15:1 

29.15 

38.03 

52.32 

57.93 

26.67 

7 

8 

9 

10 

11 

O.05 

0.15 

0.25 

0.O5 

O.15 

35:1 

30:l 

25:1 

2O:1 

15:1 

60.14 

64.80 

58.14 

56.05 

67.11 

6 6 7.8 O.3 10:1 35.79 12 12 8.6 0.25 10:l 69.78 

2.3数据处理与分析 

考虑到因素间的交互作用,将试验结果通过DIS软件进行二次多项式逐步回归分析网站排名优化,得到回归方程: 

Y=一124.16+16.81X1+5.17X4+2.18x2 一1.65X1 -0.57 X4. 

回归方程相关系数R=O.991上海网站优化排名,F=70.55>7.85=Fo (4,7)扬州百度,P<O.01,表明方程在 =0.01水平上是 

显著的.为进一步验证回归方程的可信度,根据回归方程计算各试验组的拟合值并作图百度推广seo,结果如图2所示. 

分析回归方程谷歌优化排名,对方程各因子进行t检验,结果如表3所示. 

・652・ 福建农林大学学报(自然科学版) 第40卷 

显著的交互抑制作用.最终得到的理论更佳参数为:提取时间1O h深圳sem,提取液pH 9.0,提取液浓度O.25 mol・ 

L~,提取液液料比10:1.在此条件下蛋白质提取率理论值为70.22%.SDS.PAGE电泳结果表明,此蛋白质 

提取物中存在银杏营养贮藏蛋白质. 

参考文献 

[1]林清洪,黄维南义乌网站优化,林光荣,等.银杏资源的合理开发与利用[J].福建农业科技潜江网,2006,28(3):15—16. 

[2]陈月异南通网站优化,史敏晶沈阳百度推广,田维敏.印度紫檀营养贮藏蛋白质的主要特性[J].林业科学,2007,43(9):14—18. 

[3]FEUSSNER I,WASTERMAtLK C.The lipoxygenase pathway[J].Ailnu Rev Plant Bid,2002网站数据分析,53:275—297. 

[4]郭红彦,谭鹏鹏关键词seo培训,吴青霞友情链接网,等.银杏营养贮藏蛋白质的sDS——聚丙烯酰胺凝胶电泳研究[J].山西农业大学学报,2007巩义网站优化, 

27(1):16—20. 

[5]郭娟pagerank,彭方仁,黄金生.银杏营养贮藏蛋白质的超微结构特征及季节变化[J].电子显微学报,2002,21(2):141—145. 

[6]方开泰.均匀设计与均匀设计表[M].北京:科学出版社邓州网,1994:13—17. 

[7]魏强华怀化网络公司,邓桂兰华罡,李桂锋.均匀设计法优化蜂胶水提除蜡工艺[J].食品工业科技site baidu com,2O07排名推广,28(7):116—118. 

[8]付中民收录网址,高杰,杨文超网站营销,等.油菜蜂花粉软胶囊复配化剂的研制[J].福建农林大学学报:自然科学版app优化方案,2009,38(4): 

393—395. 

[9]王孝平关键字挖掘,刑树礼.考马斯亮蓝法测定蛋白含量的研究[J].天津化工危机公关的5s原则,2009,23(3):40—41. 

[10]莫重文.蛋白质化学与工艺学[M].北京:化学工业出版社,2007:82—86. 

[11]陈振家,郝利平.山西不同品种大豆贮藏蛋白提取及亚基分析[J].山西农业大学学报,2007,27(1):75—78. 

[12]陈建南网站优化软件,刘纪华seo管家中心,李海民.半野生大豆78贮藏蛋白的提取及某些特性的研究[J].大豆科学,1986相关指数,4(1):37—42. 

[13]张俊环,王玉柱活动网络推广,孙浩元,等.杏树皮可溶性总蛋白的提取与浓缩方法探讨[J].北方园艺竞价开户推广,2009(11):51—53. 

[14]STASWICK P E.Storage protein of vegetative plant tissues[J].Annu Rew Plant Physiol Mol Biol,1994。45:303—322. 

(责任编辑:叶济蓉) 

可惜没如果歌词-不一样的美男子全集